非小细胞肺癌（NSCLC）是肺癌的主要亚型,其进展与表皮生长因子受体（EGFR）突变密切相关。第三代EGFR-TKI奥希替尼作为一线治疗药物,但其在C797S突变背景下产生耐药问题迅速失效。现有第四代EGFR-TKIs因抑制活性不足(ISCH727965浓度C50>500 n M)或体内药效欠佳（肿瘤抑制率<50%）未能进入临床,亟需开发四代抑制剂以克服耐药性并改善预后。本研究基于2-芳基-4-氨基喹唑啉骨架优化设计,以克服EGFR C7Cardiac biomarkers97S突变耐药性并保持对野生型EGFR的选择性。优化策略包括保留ATP口袋结合核心（4-氨基喹唑啉）,在4位引入哌嗪或吗啉以改善理化性质,延长侧链增强分子柔性以适应C797S突变,并在2位芳基引入不同取代基。共合成26个衍生物,在细胞水平评价其抗肿瘤活性,以验证设计合理性。其中,化合物5g在EGFRDel19/T790M/C797S突变的NSCLC细胞中表现出优异抑制活性(IC50=0.153μM,较奥希替尼提升17倍)。同时,该化合物对正常肺支气管上皮细胞BEAS-2B的毒性较低(IC50>20μM,选择性指数>180),优于阳性对照奥希替尼。进一步研究表明,化合物5g在Transwell实验中抑制细胞迁移能力。此外,克隆形成实验和Ed U染色结果显示,5g能有效抑制单细胞克隆增殖形成,同时Calcein-AM/PI双染证实其可诱导细胞凋亡。在PC-9耐药细胞异种移植模型中,5g展现出体内抗肿瘤活性,肿瘤生长抑制率分别达到47.3%和64.2%,高于奥希替尼（16.07%）。且实验期间,小鼠体重保持稳定,无死亡病例,主要器官未见明显病理损伤,血清生化指标无显著变化。这些结果表明,5g在EGFR C79PEG300小鼠7S突变介导的奥希替尼耐药NSCLC细胞中表现出显著的抗肿瘤活性。本研究聚焦于EGFR三突变（C797S）耐药问题,这是临床上尚未解决的关键挑战,而非针对已有多种靶向药可供选择的传统激活突变（Del19、L858R、T790M）。在分子骨架选择上,不同于四代EGFR-TKIs普遍采用的嘧啶结构,本研究基于2-芳基-4-氨基喹唑啉进行优化,以提高对耐药NSCLC细胞的抑制活性,本研究的化合物设计可为克服C797S突变耐药性提供一定参考。