尿酸性肾病(hyperuricemicnephropathy,HN)是高尿酸血症的严重并发症,其主要病理特征之一是尿酸钠晶体(monosodiumurate,MSU)沉积在肾脏引发严重的肾脏炎症。目前市场上治疗HN的药物多以降低尿酸水平和抗炎治疗为主,但均有较多毒副作用。细胞焦亡(pyroptosis)是一类细胞程序性死亡方式(programcelldeath,PCD),其特征是细胞膜通透性改变与炎性细胞因子释放到胞外,继发更为严重的炎症反应。黄芩苷是从中药黄芩根部提取出的黄酮类化合物,具有广泛的抗炎与抗氧化应激等药理活性。本研究建立MSU诱导人肾小管上皮细胞(human kidney-2,HK-2)损伤模型,采用形态学观察、生化指标检测、蛋白印迹、荧光定量PCR、分子对接、分子动力学模拟、蛋白抑制剂等方法和技术探讨黄芩苷抑制MSU诱导HK-2细胞焦亡的作用及机制。(1)探究黄芩苷(20、40、80μM)对MSU(2mg/m L)诱导HK-2细胞损伤12h的作用。使用试剂盒检测胞外LDH水平,显微镜观测细胞超微形态,蛋白印迹与荧光定量PCR检测焦亡相关蛋白与基因的水平。结果表明MSU诱导HK-2细胞膜损伤;经典焦亡通路NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD、IL-1β的基因与蛋白水平均显著增加。黄芩苷(40、80μM)对以上MSU诱导的细胞损伤有显著的抑制作用,并抑制经典焦亡通路。(2)通过分子对接与分子动力学模拟技术探究黄芩苷与MSU诱导的经典焦亡通路NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD蛋白之间的相互作用规律。结果表明黄芩苷可能通过抑制NLRP3炎症小体的组装,阻止膜穿孔蛋白GSDMD在胞膜上的寡聚化发挥抗焦亡作用。(3)探究黄芩苷(80μM)、Panx-1抑制剂丙磺舒(1community-acquired infections00μM)与P2X7抑制剂亮蓝G(5μM)对MSU(2mg/m L)诱导的HK-2细胞内嘌呤能通路的激活以及对经典焦亡通路的影响。检测胞外LDH水平,显微镜观测细胞超微形态,蛋白印迹与荧光定量PCR检测嘌呤能通路相关蛋白与基因的水平。结果表明MSU上调Panx-1与P2确认细节X7基因与蛋白的表达,使用丙磺舒与亮蓝G能阻断嘌呤能通路并显著下调经典焦亡通路基因与蛋白水平。黄芩苷(80μM)对嘌呤能通路和经典焦亡通路均有显著的抑制作用。综上所述,MSU激活HK-2细胞内Panx-1/P2X7嘌呤能信号通路与NLRP3炎症小体介导的经典焦亡通路,在高尿酸环境下诱发严重的肾脏细胞焦亡。黄芩苷能下调MSU激活的嘌呤能通路与经典焦亡通路,通过减轻胞外损伤信号传导减少肾脏细胞GW-572016使用方法焦亡发挥抗HN作用,具有治疗HN的可观潜力。