鹦鹉热嗜衣原体蛋白酶样活性因子免疫优势区基因重组蛋白的诊断应用研究

目的检测鹦鹉热嗜衣原体(Chlamydophila psittaci,Cps)蛋白酶样活性因子(chlamydial protease-like activity factor,CPAF)免疫优势区基因在E.coli BL21中高效表达的产物在Cps感染诊断中的应用,为建立Cps感染的快速诊断奠定实验基础。方法利用生物信息学软件筛选出CSBE-β-CD分子量psCPAF免疫优势区基因序列(CPAFm,A196～A45Bioluminescence control0),设计特异性引物,PCR扩增目的基因,将其克隆入pGEX6p-2载体后转化E.coli BL21,利用IPTG诱导表达重组蛋白,Western blot鉴定重组蛋白。以纯化的重组蛋白作为包被抗原,建立血清学诊断的间接ELISA法;同时用商品ELISA试剂盒与建立的间接ELISA法检测180份可疑Cps感染的病鸭血清标本,将检测结果进一步用Western blotBMS-354825抑制剂方法验证。结果构建原核重组质粒pGEX6p-2/CPs CPAFm,表达相对分子质量约为54×10~3的目的蛋白产物。以纯化的重组蛋白为包被抗原建立间接ELISA法检测Cps参考血清,其阴、阳性符合率均为100%;与肺炎嗜衣原体(C.pneumoniae,Cpn)、沙眼衣原体(C.trachomatis,Ct)无交叉反应。对180份可疑病鸭血清标本进行检测,与商品Birds Chlamydia Psittaci IgG ELISA试剂盒比较,以Western blot方法作对照,自建的ELISA法符合率均为100%,Birds Chlamydia Psittaci IgG ELISA Kit符合率为77.5%～95.0%。结论以Cps CPAF免疫优势区(A196～A450)作为诊断抗原,建立血清学诊断的间接ELISA法具有较好的临床诊断价值。