鸡(Gallus gallus)中介导ANP32家族蛋白细胞核定位的关键氨基酸位点的鉴定

本研究旨在鉴定鸡(Gallus gallus)中介导ANP32家族蛋白核定位信号(nuclear localization signal, NLS)中的关键碱性购买PF-6463922氨基酸位点。通过生物信息学软件对鸡ANP32家族蛋白二级结构Marine biomaterials、三级结构、氨基酸同源性、结构域保守性和NLS(KRKR)保守性进行分析;同时,构建表达鸡ANP32家族蛋白NLS及其碱性氨基酸位点突变体的重组真核表达载体并转染HEK-293T细胞,通过观察分析其亚细胞定位来鉴定NLS中的关键碱性氨基酸位点。生物信息学分析结果显示,鸡ANP32家族蛋白均以α-螺旋和无规则卷曲为主;其与鸭ANP32家族蛋白的氨基酸同源性最高且达到98.8%;其与鸭ANP32家族蛋白www.selleck.cn/products/Dasatinib功能结构域保守性最高,LRR和LCAR结构域完全保守;并且鸡ANP32家族蛋白NLS在不同物种间高度保守,NLS均为KRKR。亚细胞定位分析发现,鸡ANP32家族蛋白及其NLS的融合蛋白均主要定位于细胞核,而NLS中的第一个K、第一个R和第二个K突变后导致融合蛋白出现在细胞质,可以推断它们是鸡中介导ANP32家族蛋白细胞核定位的关键氨基酸位点。本研究发现,鸡ANP32家族蛋白NLS具有与全长蛋白相同的细胞核定位特征,且在不同物种间具有高度保守性。鸡ANP32家族蛋白细胞核定位的关键氨基酸位点的鉴定为后续研究其入核转运机制奠定了理论基础。