免疫应激是指动物受到细菌、病毒等微生物侵害或接种疫苗后,引发机体免疫系统过度激活的状态。动物处在该状态下,会出现精神沉郁、食欲不振和代谢加快等现象,严重影响动物的健康和生长性能,同时也会增加动物的发病率和死亡率,降低饲料转RNAi-based biofungicide化率,从而对畜牧业发展及效益产生严重的负面影响。随着国家深入贯彻绿色养殖理念,寻找代替抗生素的新型兽药成为重要的研究方向,而中兽药因其低毒、不易产生耐药性和药理作用多等优点引起广泛关注。鱼腥草(Houttuynia cordata Thunb.)为三白草科蕺菜的地上部分,味辛,性寒,主要功效为清热解毒、消痈排脓,具有抗炎、抗病毒、抗肿瘤和提高免疫力等多种药理作用,主要含有黄酮、挥发油和有机酸等化学成分。本研究通过单因素-响应面试验优化鱼腥草总黄酮超声提取法提取条件;对鱼腥草总黄酮化学成分进行初步分析鉴定;利用脂多糖(LPS)腹腔注射建立大鼠免疫应激模型,根据日增重、胸腺指数、脾脏指数、白细胞及其分类变化评价鱼腥草总黄酮对免疫应激的调节作用;采用实时荧光定量PCR法(RT-q PCR)和蛋白免疫印迹法(Western Blot,WB)分别测定大鼠脾脏组织TLR4-TRIF-NF-κB信号通路中TLR4、TRIF、p65、p-p65、IκB和p-IκB的m RNA和蛋白相对表达水平;采用液质联用(LC-MS)技术探讨鱼腥草Canagliflozin供应商总黄酮干预免疫应激大鼠后,代谢物和代谢通路的差异变化,较为全面地揭示鱼腥草总黄酮对免疫应激大鼠的免疫调节作用及机制。本研究通过单因素-响应面试验优化出鱼腥草总黄酮超声提取法的提取工艺为:乙醇浓度30%,料液比1:35 g/m L,提取时间25 min,在该工艺下鱼腥草总黄酮含量为6.94%;采用UPLC-QTOF/MS法初步推断出鱼腥草总黄酮中的22个化学成分;鱼腥草总黄酮能够上调免疫应激大鼠日增重、脾脏指数和淋巴细胞百分比,下调白细胞个数、中性粒细胞百分比、中性粒细胞数和淋巴细胞数,降低TLR4、TRIF、p6STM2457说明书5 m RNA相对表达水平,促进IκB m RNA相对表达水平,抑制TLR4、TRIF、p65、p-p65和p-IκB的蛋白相对表达水平;代谢组学试验结果表明,与模型组相比,鱼腥草总黄酮处理组共有31种差异代谢产物,通路富集在亚油酸代谢和甘油磷脂代谢两条通路。综上所述,本研究优化了鱼腥草总黄酮的提取方案,并对其中的化学成分进行了初步鉴定;利用LPS诱导的免疫应激大鼠模型,初步明确了鱼腥草总黄酮的免疫调节作用,并揭示其免疫调节作用与激活TLR4-TRIF-NF-κB信号通路密切相关;同时通过代谢组学研究,进一步说明鱼腥草总黄酮的免疫调节作用与亚油酸代谢和甘油磷脂代谢密切相关。本试验将为兽医临床免疫调节中兽药的研究和开发提供重要参考。