目前治疗战创伤疼痛的药物主要是阿片类药物,但SAG是阿片类药物具有局限性,易成瘾、易耐受,对呼吸、胃肠道和中枢神经系统等存在诸多副作用。因此,开发新型镇痛药物对于保持战士的战斗力和减少患者的痛苦至关重要。河豚毒素(Tetrodotoxin,TTX)作为特异性钠离子通道阻滞剂,具有良好的镇痛活性,不产生耐受、无成瘾性,不良反应轻微且短暂,有望成为战创伤镇痛新药。本课题研究的目的:开展TTX原料药、粉针剂的质量及工艺初步研究,包括TTX原料药质量标准研究、TTX粉针剂的制备工艺及质量标准研究,并进行初步稳定性考察,为申报新药临床试验资料提供参考依据。主要研究内容如下:1.TTX原料药的质量研究:参考《中国药典》(2020版)相关规定,对TTX原料药的性状、鉴别、检查、含量测定、有关物质和稳定性等项目进行研究。2.TTX粉针剂的制备工艺研究:根据TTX原料药的质量分析结果和相关的文献专利,结合其应用场景,对TTX粉针剂进行处方筛选和制备工艺优化。3.TTX粉针剂的质量研究:参考《中国药典》(2020版)相关规定,对TTX粉针剂的性状、鉴别、检查、含量测定、有关物质和稳定性等项目进行研究。研究结果如下:1.TTX原料药的质量研究:本品为白色粉末,溶于酸性水溶液或醇溶液,极微溶于水,不溶于有机溶剂,在191 nm的波长处有紫外最大吸收。本品中未检出磷酸盐和铵盐,干燥失重小于0.1%。建立了TTX原料药及有关物质的含量测定方法,色谱条件如下:高效液相色谱仪为Agilent 1260 infinity II,检测器为蒸发光散射检测器,色谱柱为Gel Amide-80(150 mm×2 mm,5μm);流动相为乙腈:含5mmol/L乙酸铵的0.1%甲酸溶液(70:30)(V:V);漂移管温度为105℃、气体流量为1.8 L/min、雾化器温度为80℃、增益为1;柱温为40℃,流速为0.2 m L/min,进样量为10μL。在该条件下TTX与有关物质达到完全分离,溶剂对含量测定无影响,线性关系好,专属性强,耐用性好,准确度与精密度高,能够准确测定TTX原料药的含量。根据测定结果,将本品的含量限度定为不低于98.0%,规定杂质峰面积之和不得大于对照溶液的主峰面积(1.0%)。加速试验6个月,本品的性状、含量、有关物质均未发生明显变化。2.TTX粉针剂的制备工艺研究:通过单因素考察,得到处方及制备工艺流程为:精密称取柠檬酸21Specialized Imaging Systems.01 mg和柠檬酸钠29.41 mg,加注射用水1000 m L将其溶解,加入TTX10 mg搅拌10 min,加入L-半胱氨酸100 mg,甘露醇40 g,继续搅拌15 min,溶解完全,测定p H值,经高效液相色谱-二极管阵列检测法测定TTX的含量,灌入3 m L卡式瓶,每瓶1 m L,-80℃预冻,48 h升华干燥,制成每瓶约含10μg TTX的粉针剂,与一次性混药注射器配合使用。3.TTX粉针剂的质量研究:本品为白色疏松块状物,复溶后溶液澄清无色、无可见异物,p H值为4.6～4.7,平均装量在0.068 g左右,装量差异为±1%,含水量小于0.1%。建立了TTX粉针剂及有关物质的含量测定方法,色谱条件如下:高效液相色谱仪为Agilent 1260 infinity II,检测器为二极管阵列检测器,检测波长为200 nm,色谱柱为Acclaim PA2液相色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为50 mmol/L磷酸二氢铵:10 mmol/L庚烷磺酸钠(70:30)(V:V),流速为1 m L/min,柱温为30℃,进样量为10μL。在该条MRTX1133分子式件下TTX与有关物质达到完全分离,溶剂和辅料对含量测定无影响,线性关系好,专属性强,耐用性好,准确度与精密度高,能够准确测定粉针剂中TTX的含量。根据测定结果,暂定本品含TTX按标示量计算应为90.0%～110.0%,规定总杂质含量不得超过1.0%。本品在高温、高湿、强光条件下,其性状、TTX含量、有关物质含量没有明显变化,且在加速试验和长期试验(6个月)考察下,本品的性状、TTX含量、有关物质含量也均没有明显变化。结论:本课题开展了TTX原料药的质量、粉针剂的制备工艺及质量初步研究,建立了TTX原料药的质量标准,确定了TTX粉针剂的制备工艺、制定了其质量标准,并通过初步稳定性考察确定了其储存条件和有效期,为申报新药临床试验资料提供参考依据。