目的:胶质瘤(Glioma)是常见的原发性神经系统恶性肿瘤,其治疗效果不佳,急需一种新的治疗策略。金刚烷胺(Amantadine,AMT)作为一种抗病毒和治疗帕金森病的临床用药,最近发现其具有抑制肿瘤生长的作用。该研究主要探索金刚烷胺对胶质瘤细胞生长和增殖的影响,验证金刚烷胺在体内和体外对胶质瘤的抑制作用,探讨金刚烷胺如何影响细胞凋亡和自噬,并研究其分子机制。方法:1.按照设定的金刚烷胺浓度梯度,处理U87和U251胶质瘤细胞,通过CCK-8试验、克隆形成实验、Ed U实验及乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测金刚烷胺对胶质瘤细胞活力及增殖的影响。2.通过免疫印迹、流式细胞术、活性氧(Reactive oxygen species,ROS)测量及JC-1检测试剂盒等方法,检测金刚烷胺作用于胶质瘤细胞后,细胞内ROS含量与线粒体膜电位变化以及对细胞凋亡的影响;通过免疫印迹和免疫荧光MLN8237体外等实验,明确金刚烷胺对胶质瘤细胞自噬及自噬流的影响。3.构建裸鼠皮下移植瘤模型,金刚烷胺进行体内给药后,观察肿瘤标本,测量肿瘤重量与体积,通过PIN-FORMED (PIN) proteins苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)染色观察肿瘤细胞形态与数量,通过免疫组化检测Ki67表达量,验证金刚烷胺在体内的抑瘤作用;测量荷瘤裸鼠体重并绘制曲线,取其心肝脾肺肾等重要内脏行HE染色检测金刚烷胺在体内的毒副作用。4.取肿瘤组织进行免疫印迹实验和免疫组化实验,检测Cleaved-caspase3和LC3 II的表达量,明确体内胶质瘤凋亡及自噬情况。结果:1.金刚烷胺在体外抑制胶质瘤U87细胞与U251细胞的活力与增殖,且呈药物浓度依赖性。2.金刚烷胺导致胶质瘤细胞内ROS的大量累积且引起线粒体损坏,进而通过激活Caspase蛋白家族级联反应致使凋亡发生;金刚烷胺增强胶质瘤细胞ATG5、ATG7及P62的表达,促进LC3 I向LC3 II的转化,诱导自噬起始的发生且阻断了自噬流。3.金刚烷胺在体内有良好的抗胶质瘤活性,且对其他组织没有www.selleck.cn/products/vx-661明显的不良反应。4.金刚烷胺在体内促进Cleaved-caspase3和LC3 II的高表达,进而诱导凋亡和自噬的发生。结论:金刚烷胺通过在体内外诱导细胞凋亡和细胞自噬,从而抑制胶质瘤的生长和增殖。