达格列净通过TGF-β/VEGFC信号通路促进淋巴管生成抑制心肌纤维化

目的:探讨钠-葡萄糖协同转运蛋白2抑制剂(SGLT2 inhibitor)达格列净(DAPA)在血管紧张素II(Ang II)诱导的心肌肥厚细胞和小鼠模型中的促淋巴管新生作用及其机制。方法:选取4-6周龄且体重20-25 g的C57BL/6雄性小鼠18只,随机将其分为3组:对照组、血管紧张素II组(Ang II,n=6)和血管紧张素II联合达格列净组(Ang II-DAPA,n=6),通过腹腔注射DAPA和皮下注射Ang II的方法构建小鼠的心肌肥厚模型,同时饲养8周后称重Anti-idiotypic immunoregulation,麻醉后使用超声心动图评估各组小鼠的心功能研究,包括EF、FS等。之后处死小鼠并收集心脏组织称重,苏木精-伊红染色观察小鼠心脏的病理变化,同时使用免疫组织化学染色观察TGF-β1、I型胶原、III型胶原、α-SMA、VEGFC和VEGFR3的表达情况,Western blot法定量测定小鼠心脏组织的蛋白表达情况。然后,将人淋巴管内皮细胞系HLECs随机分为对照组、Ang II诱导组和DAPA+Ang II干预组,分别给予不同浓度的AngICI 46474分子量 II和DAPA干预24小时诱导心肌肥厚模型,通过迁移侵袭实验观察淋巴管内皮细胞的迁移能力,Western blot法定量各组细胞的VEGFC、TGF-β表达量,通过Rescue实验验证TGF-β通路在抑制心肌纤维化和促进淋巴管新生中的重要作用。结果:(1)动物实验结果:与对照组相比,给药8周的血管紧张素II组小鼠表现出了明显的心肌肥厚,血管紧张素II联合达格列净组小鼠心脏较单纯血管紧张素II组明显减小,心肌肥厚被有效抑制。苏木素-伊红染色结果示:血管紧张素II组和血管紧张素II联合达格列净组小鼠的心脏细胞体积均高于常规组,但血管紧张素联合达格列净组的小鼠心脏细胞体积小于血管紧张素II组。Masson染色结果显示:与对照组相比,血管紧张素II组小鼠表现出明显的心肌纤维化,而达格列净干预会减轻血管紧张素诱导的心肌纤维化。免疫组织化学染色半定量结果显示:血管紧张素组的小鼠心脏组织VEGFDS-3201分子式C、VEGFR3表达量下降,α-SMA、Collagen I和Collagen III的表达量明显上升,而达格列净可以逆转这些蛋白的表达。Western blot结果显示:血管紧张素组小鼠心脏的ANP、α-SMA和TGF-β明显升高(P<0.05),而VEGFC的表达量明显下降,同样,达格列净可以逆转血管紧张素II诱导的这些蛋白表达量的变化。(2)细胞实验结果:细胞迁移实验表明与对照组相比,血管紧张素II干预会导致淋巴管内皮细胞的迁移能力下降,而达格列净可以使淋巴管内皮细胞的迁移能力增强。Western blot结果示达格列净可以通过抑制TGF-β信号通路抑制心肌纤维化,并促进心脏淋巴管新生。Rescue实验进一步证明:达格列净的抑制心肌纤维化和促进淋巴管新生作用依赖于TGF-β信号通路。结论:达格列净可以通过抑制TGF-β信号通路改善血管紧张素II诱导的小鼠心脏的心肌纤维化并促进心脏淋巴管新生。