茯苓是我国传统的药食同源中药,在古代就有十药九茯苓的美誉,现代研究表明其主要的活性物质是茯苓多糖,具有抑制癌细胞的生长、抑制炎症反应、保护肝脏、调节免疫系统等功效,然而茯苓多糖大部分是难溶于水的碱性多糖,难以发挥活性作用,为解决此问题,有研究对碱性多糖进行结构改造(引入羧甲基)获得了溶解性更好、生物活性更高的羧甲基茯苓多糖(Carboxymethyl poria polysaccharide,CMP)。但CMP在上市前还需要通过新原料的申报,该工作具有周期长、成本高等缺点。而本课题通过前期研究,利用酶水解碱性茯苓多糖,得到了一种水溶性茯苓多糖(Water-soluble poria polysaccharide,WSP)。基于上述背景,本课题旨在探究WSP的抗炎、皮肤损伤修复和美白效果。主要研究结果如下:(1)CCK-8细胞安全性试验结果表明:3、6、12、24、48、96、192和384μg/m L的WSP对RAW264.7细胞的活性均未有显著抑制作用,这说明WSP对于RAW264.7细胞具有良好的安全性;上述浓度下的WSP与0.1μg/m L的Gut microbiomeLPS共孵育对RAW264.7细胞的活性同样未有显著抑制作用,这表明上述浓度的WSP可以用于后续的细胞水平抗炎试验。WSP对Caco-2细胞的抗癌结果表明:50μg/m L的WSP处理Caco-2细胞12 h后,细胞形态明显改变;100μg/m L的WSP处理条件下,少量Caco-2细胞开始出现死亡现象;200μg/m L的WSP处理条件下,大量Caco点击此处-2细胞出现死亡现象并且细胞轮廓消失;400μg/m L的WSP处理条件下,大量Caco-2细胞死亡并且悬浮于细胞培养基中;而空白组的Caco-2细胞正常生长,说明WSP对Caco-2细胞可能具有一定的抗癌作用。(2)细胞水平抗炎试验结果表明:与空白组相比,LPS刺激后RAW264.7细胞中IL-6和TNF-α的含量显著上升(p<0.001);与经过WSP预处理的LPS组相比,6μg/m L的WSP可以显著缓解LPS引起的TNF-α和IL-1β的含量增加(p<0.001),且WSP浓度越高,TNF-α和IL-1β含量降低越显著,表明WSP的抗炎效果呈浓度依赖性。(3)动物水平抗炎试验(小鼠耳肿胀试验)结果表明:与空白组相比,玻尿酸组的小鼠耳肿胀抑制率为-54.84%,CMP组的小鼠耳肿胀抑制率为10.32%,WSP组的小鼠耳肿胀抑制率为22.12%。从上述结果可知,CMP组和WSP组小鼠耳肿胀度均显著降低(p<0.01),表明CMP和WSP具有抗炎效果;并且,WSP组降低二甲苯诱导的小鼠耳肿胀的效果显著优于CMP(p<0.01)。(4)动物水平皮肤损伤修复试验(大鼠皮肤碱烧伤试验)结果表明:与模型组的平均恢复时间为28 d相比,阳性药物京万红组的平均恢复时间为16 d,CMP组的平均恢复时间为19 d,WSP的平均恢复时间为18 d。上述结果说明,与模型组相比,阳性药物京万红组、CMP组和WSP组的恢复时间均显著缩短,表明CMP和WSP均具有促进皮肤损伤修复的作用,但两组无显著性差异。(5)动物水平抗炎试验(小鼠溃疡性结肠炎试验)结果表明:WSP可以缓解溃疡性结肠炎的表观症状:小鼠溃疡性结肠炎后,摄入WSP和CMP,体重下降趋势得到抑制,与空白组比较,模型组小鼠DAI评分显著升高(p<0.01);与模型组比较,CMP组和WSP低、中、高剂量组小鼠DAI评分显著降低(p<0.01),在同等剂量下,CMP组和中剂量组的DAI评分没有显著差异。WSP可以有效改善溃疡性结肠炎小鼠的血细胞水平,摄入WSP和CMP的小鼠,白细胞水平显著低于DSS组(p<0.01),CMP组和WSP低、中、高剂量组的单核细胞水平显著低于DSS组(p<0.001),CMP组和WSP中剂量组的红细胞数量和HCT水平显著高于DSS组(p<0.01),WSP低、高剂量组的红细胞数量和HCT水平显著高于DSS组(p<0.001)。WSP可以修复溃疡性结肠炎的组织损伤,与模型组比较,CMP组和WSP低剂量组小鼠结肠长度增加(p<0.05),WSP中、高剂量组小鼠结肠长度显著增加(p<0.01);在结肠组织病理切片的表现也与结肠长度相对应,CMP组和WSP低、中、高剂量组的结肠病理情况均有不同程度的改善,且随着WSP浓度的升高,结肠组织损伤情况会减轻。WSP可以显著降低溃疡性结肠炎小鼠的炎性因子水平,与模型组相比,CMP组和WSP低、中、高剂量组的血清中的TNF-α、IL-1β和IL-6含量均显著降低。(6)美白效果试验(酪氨酸酶抑制试验)结果表明:在本实验条件下,CMP、WSP对于酪氨酸酶均没有明显抑制效果。selleckchem Cobimetinib综上所述,本研究发现WSP对RAW264.7炎性细胞、皮肤炎症、结肠炎具有显著的抗炎作用,对于结肠癌细胞Caco-2具有杀灭作用,此外本研究还发现了WSP对于皮肤损伤也具备促修复效果。