本课题通过采用大鼠原位自体肝移植(Autogenous orthotopic liver transplantation,AOLT)肝脏冷缺血再灌注(Ischemia-reperfusion,I/R)诱发肠损伤模型,明确大鼠AOLT肝脏冷I/R诱发肠损伤中是否有铁死亡发生以及观察铁死亡抑制剂Ferrostain-1对自体原位肝移植大鼠肠的保护作用,同时探讨铁死亡激活剂柳氮磺吡啶(SulfasalazGW4869说明书ine,SAS)在大鼠AOLT肝脏冷I/R诱发肠损伤铁死亡的作用与可能机制。第一部分铁死亡在大鼠自体肝移植围术期肠损伤中的作用研究目的:利用大鼠AOLT模型,观察脂质活性氧(Lipid reactive oxygen species,L-ROS)抑制剂Ferrostain-1作用于铁死亡信号通路,明确大鼠AOLT肝脏冷I/R诱发肠损伤中是否有铁死亡发生。方法:SPF级健康雄性成年SD大鼠18只,10～12周龄,体重300±20 g,采用随机数字表法分为3组(n=6):假手术组(Sham组)、模型组(I/R组)、铁死亡抑制剂Ferrostain-1组(I/R+Fer-1组)。Sham组大鼠在麻醉完善后沿腹中线开腹,剥离出肝周围血管及韧带后关闭腹腔;I/R组大鼠采用AOLT肝脏冷I/R模型,使用4℃0.9%注射用生理盐水从门静脉持续灌注,30±1 min后恢复大鼠肝脏血流灌注,温盐水冲洗后关闭腹腔;I/R+Fer-1组大鼠建模前1 h腹腔注射Fer-1 5 mg/kg,操作步骤同I/R组。于再灌注后24 h从大鼠肝下下腔静脉抽取血液;并切取部分大鼠回肠组织行相关指标检测;高倍显微镜下观察肠组织切片病理变化;采用ELISA法测定血清IL-6水平及肠损伤标记物二胺氧化酶(Diamine Oxidase,DAO)水平;用硫代巴比妥酸法测定大鼠肠组织丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量及血清MDA浓度;并应用相关试剂盒检测肠组织内Fe~(2+)AD biomarkers含量及超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、还原性谷胱甘肽(Glutathione,GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶4(Glutathione peroxidase 4,GPX4)浓度;Western Blot法检测铁蛋白重链(Ferritin heavy chain,FTH1)和溶质载体家族7成员11(Solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)蛋白表达水平。结果:与Sham组比较,I/R组和I/R+Fer-1组大鼠再灌注后24 h肠Chiu’s评分和W/D比率均增高(P<0.05);血清内IL-6、MDA水平显著升高(P<0.05);肠组织DAO、MDA、Fe~(2+)水平显著升高(P<0.05);肠组织SOD、GSH、GPX4水平降低(P<0.05);肠组织FTH1和SLC7A11蛋白表达均下调(P<0.05)。与I/R组比较,I/R+Fer-1组大鼠再灌注后24 h的肠Chiu’s评分及W/D比率均下降(P<0.05);血清内IL-6、MDA水平降低(P<0.05);肠组织DAO、MDA、Fe~(2+)水平显著下降(P<0.05);肠组织SOD、GSH、GPX4水平升高(P<0.05);肠组织FTH1和SLC7A11蛋白表达均上调(P<0.05)。结论:铁死亡参与了大鼠肝脏冷缺血再灌注诱发肠损伤的病理生理过程。第二部分柳氮磺吡啶对肝移植大鼠肠损伤铁死亡的影响及机制目的:探讨铁死亡激活剂柳氮磺吡啶(Sulfasalazine,SAS)在大鼠AOLT肝脏冷I/R诱发肠损伤铁死亡的作用与可能机制。方法:SPF级成年雄性SD大鼠60只,采用随机数字表法分为5组(n=12):假手术组(Sham组)、模型组(I/R组)、Ferrostain-1组(I/R+Fer-1组)、SAS组(I/R+SAS组)、SAS+Ferrostain-1组(I/R+SAS+Fer-1组)。并于I/R后6 h和24 h,分别随机选取大鼠6只。I/R组术前1 h腹腔注射等容量DMSO 1 ml,I/R+Fer-1组术前1 h腹腔注Ferrostain-1 5 mg/kg;I/R+SAS组术前连续7天腹腔注射SAS(2次/d,每次500 mg/kg);I/R+SAS+Fer-1组连续7天腹腔注射SAS(2次/d,每次500 mg/kg),并在术前1 h腹腔注射Ferrostain-1 5 mg/kg。于建模后6h和24h取下腔静脉血标本,采用ELISA法测定测定血清MDA、IL-6浓度;各组于建模后6h和24h取回肠组织,光镜下观察肠组织病理切片;用试剂盒测定肠SOD、MDA、GSH、GPX4、Fe~(2+)含量;采用Western Blot法测定GPX4、SLC7A11蛋白表达。结果:与Sham组比较,其余各组在大鼠建模后6 h和24 h Chiu’s评分和W/D比率升高(P<0.05);血清IL-6、MDA水平显著升高(P<0.05);肠组织DAO、MDA、Fe~(2+)水平显著升高(P<0.05);肠组织SOD、GSH、GPX4水平降低(P<0.05);肠组织FTH1和SLC7A11蛋白表达均下调(P<0.05)。与I/R组比较,I/R+SAS组在大鼠建模后6 h和24 h Chiu’s评分和W/D比率升高(P<0.05);血清IL-6、MDA水平升高(P<0.05);肠组织DAO、MDA、Fe~(2+)水平显著升高(P<0.05);肠组织SOD、GSH、GPX4水平降低(P<0.05);肠组织FTH1和SLC7A11蛋白表达均下调(P<0.05)。与SAS组比较,I/R+SAS+Fer-1组在大鼠建模后6 h和24 h Chiu’s评分和W/D比率降低(P<0.05);血清IL-6、MDA水平降低(P<0.05);肠组织DAO、MDA、Fe~(https://www.selleck.cn/products/SB-431542.html2+)水平显著降低(P<0.05);肠组织SOD、GSH、GPX4水平增加(P<0.05);肠组织GPX4和SLC7A11蛋白表达均上调(P<0.05)。另外,大鼠自体LT肝脏I/R过程中,再灌注6h和24h各项指标变化趋势基本相同,差异不明显。结论:SAS在大鼠AOLT肝脏冷I/R诱发肠损伤中可能通过抑制System Xcˉ/GSH/GPX4信号轴或再灌注后铁超载,造成L-ROS大量积累,激活细胞铁死亡,使肠损伤进一步加重。