微孢子虫(Microsporidia)是一类专性细胞内寄生的微生物,广泛寄生于无脊椎动物和脊椎动物,分类地位上属于真菌界微孢子虫门。昆虫中发现的微孢子虫大多属于微孢子虫科(Nosematidae)。由于微孢子虫寄生具有亚致死性,传播途径多样,使得该病原物难以发现导致感染范围的扩大,大大降低了昆虫生命力并影响宿主的繁殖能力,严重影响经济类昆虫的生产。微孢子虫引发的微粒子病(pébrine disease)最先发现于家蚕中,至今仍影响着蚕种繁育的安全,是蚕业生产中的唯一检疫性病害。柞蚕微孢子虫(Nosema pernyi)是寄生于柞蚕(Antheraea pernyi)中的一种病原微生物,微孢子虫寄生后会引发宿主的黑化包被而呈现出浑身“渣点”。本研究以柞蚕微孢子虫为研究对象,通过比较不同微生物、孢子不同状态在侵染过程中呈现差异化的黑化包被现象。探究了微孢子虫通过影响柞蚕磷脂酶A_2(PLA_2)介导的前列腺素途径,在体液免疫和细胞免疫水平产生重要影RAD001抑制剂响,目的在于探究柞蚕微孢子虫如何通过影响柞蚕磷脂酶A_2(PLA_2)介导的类二十烷酸免疫途径,对从分子水平揭示柞蚕微孢子虫与宿主之间的免疫互作有基础性意义,具体结果如下:1.微孢子虫的孢子发芽能力与侵染能力呈正相关。本实验比较了不同条件诱发的柞蚕微孢子虫发芽率的差异,筛选出H_2O_2是影响微孢子虫萌发的关键信号因子。进而通过不同微生物引发的柞蚕成瘤反应对比,柞蚕微孢子虫表现出明显的免疫逃逸黑化包被能力,活微孢子虫的逃逸能力尤其明显。2.通过克隆获得了2个柞蚕PLA_2基因,通过Blast比对和生物信息学分析后命名为ApPLA_2XIIA和ApPLA_2XV。不同微生物诱导下2个基因表达呈现差异性,柞蚕微孢子虫长期寄生能够显著抑制ApPLA_2XIIA和ApPLA_2XV的表达。注射PLA_2抑制剂DEX或PLA_2的下游产物花生四烯酸(AA)后再进行微孢子虫诱导会改变ApPMuscle biopsiesLA_2XV的表达量,表明柞蚕微孢子虫对宿主PLA_2含量有影响。3.通过体液免疫和细胞免疫证实柞蚕微孢子虫能够影响ApPLA_2介导GSK J4使用方法的免疫过程:通过体外的血淋巴实验表明柞蚕微孢子虫能够影响血细胞黑化反应和凝集作用。柞蚕微孢子虫的侵染影响了体液免疫中ApPLA_2的含量和下游多酚氧化酶(PPO)活性、活性氧的含量;血细胞凝集试验显示柞蚕微孢子虫可以减缓血细胞凝集。