目的:拟探讨恩格列净(empagliflozin)对造影剂相关急性肾损伤(contrast-associated acute kidney iTezacaftor化学结构njury,CA-AKI)的作用和机理。方法:本实验主要包括SD大鼠、小鼠和细胞实验,所有实验动物均在适应性喂养1周后开展相关实验。第一部分实验:将雄性SD大鼠分配为如下4组:对照组、恩格列净组、模型组以及模型+恩格列净组。对照组大鼠,生理盐水(1.5 mg/kg)灌胃治疗,1次/日,恩格列净组给与等量恩格列净(1.5mg/kg)灌胃,1次/日,两组连续灌胃7日;模型组禁水16小时后,建立造影剂相关急性肾损伤(contrast-associated acute kidney injury,CA-AKI)模型;模型+恩格列净组,造模前连续7天恩格列净(1.5 mg/kg.d)灌胃,禁水16小时后建立CA-AKI模型。注射碘海醇造模后继续进食和饮水喂养,12小时后对所有大鼠实施安乐死,并收集双肾和血清标本。利用ELISA方法测定血清肾功能相关指标,HE染色检测肾脏病理损伤及评分,利用蛋白印迹实验和免疫组织化学染色试剂对凋亡相关蛋白表达率进行定量分析,并利用TUNEL细胞凋亡染色荧光显影测定,进而评估大鼠肾脏细胞的凋亡阳性率;第二部分实验,为了研究恩格列净对CA-AKI发生发展的具体机制,采用了小鼠及细胞实验展开研究,将健康的C57 genetics and genomicsBL/6J雄性小鼠,随机分配到以下对照组、模型组、模型+生理盐水组和模型+恩格列净组4组。模型组小鼠禁水18小时,在腹腔内注射碘海醇造影剂,进而建立CA-AKI小鼠模型;模型+生理盐水组小鼠实验干预,CA-AKI造模前7天,持续予以生理盐水(1.5mg/kg)灌胃,1次/日,模型+恩格列净组小鼠,持续7天予以恩格列净(1.5mg/kg)灌胃,1次/日,两组小鼠均禁水18小时后CA-AKI造模;对照组小鼠不接受缺水、速尿、碘海醇和恩格列净处理,在正常环境下养育。碘海醇注射12小时后收集标本。通过ELISA、HE染色评估肾功能及肾脏病理损伤,通过蛋白印迹检测凋亡相关蛋白,并通过TUNEL细胞凋亡染色荧光显影测定技术对小鼠肾脏的组织进行染色反应,以了解及判定组织细胞凋亡阳性率;各组组织经包埋、制片等处理,经线粒体透射电镜视野观察,了解线粒体的外观及细微结构的变化情况;通过免疫组织化学染色实验,对各组解偶联蛋白2(Uncoupling protein 2,UCP2)表达量进行定量;细胞实验:将肾小管上皮细胞(HK-2)划分为对照组、模型组、模型+溶剂组以及模型+恩格列净组。模型组用含有碘海醇(80 mg I/ml)的高糖培养基培养,模型+溶剂组用高糖培养基与DMSO溶剂培养细胞,模型+恩格列净组先给与含恩格列净的培养基预处理,然后使用含有高糖+碘海醇的培养基进行养育,经处理约2小时后进行线粒体活性物质细胞活力CCK-8 OD值测定,通过JC-1线粒体膜电位荧光作用探针实验、DCFH-DA活性氧ROS荧光探针等实验评估线粒体结构及功能状况,通过Western Blotting检测线粒体融合和分裂相关蛋白的表达情况。U点击此处CP2基因敲除小鼠相关的实验:将UCP2基因敲除小鼠随机分配为对照组,模型组,模型+生理盐水组和模型+恩格列净组,各组UCP2基因敲除小鼠的相关干预措施同C57小鼠相关实验。结果:模型组的动物肾功能、肾脏病理损伤及肾脏组织细胞凋亡较对照组显著增加,且线粒体肿胀、嵴排列紊乱和破裂;恩格列净预处理后动物肾功能、肾脏病理损伤及肾脏细胞凋亡较模型组明显缓解,线粒体结构恢复正常;HK-2细胞实验结果表明,模型+恩格列净组细胞线粒体膜电位较模型组升高,膜电位恢复至平衡,同时提示氧化应激反应显著抑制;恩格列净预处理解偶联蛋白2(UCP2)基因敲除小鼠,不能缓解造影剂对肾功能的损伤,同时线粒体的结构及功能破坏未能被修复。结论:恩格列净通过激活解偶联蛋白2(UCP2)调控氧化应激和细胞凋亡,从而缓解造影剂相关急性肾损伤。