目的：制备大鼠SUMO特异性蛋白酶1(sentrin-specific protease, SENP1)催化结构域(SENP1C)蛋白，并鉴定其酶活性。方法：分别以大鼠SENP1-pcDNA3.1和EGFP-pcDNA3.1重组体为模板，PCR扩增目的基因，克隆入pGEM-T载体；酶切鉴定后，再亚克隆入原Ready biodegradation核表达载体pET-28a;阳性重组体导入原核表达细胞BL-21,异丙基硫半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白质表达；SDS-PAGE及考马斯亮蓝染色鉴定蛋白质的表达。Ni-NTA吸附纯化蛋白质并透析处理，SDS63845体内实验剂量S-PAGE及考马斯亮蓝染色鉴定蛋白质的纯度；1μmol/L及5μmol/L Tat-EGFP分别孵育HT22细胞不同时间，荧光显微镜下观察细胞转染情况。采用5μmol/L Tat-SENP1C预孵育HT22细胞10 h,免疫印迹检测整体蛋白质的SUMO化水平；用5μmol/L Tat-SENP1C预孵育HT22细胞或过表达Myc-Akt1和HA-SUMO1的HT22细胞10 h后，selleck PF-02341066免疫沉淀和免疫印迹检测内源性和外源性Akt1与SUMO1的结合(SUMO化)。结果：Tat-SENP1C-pET-28a和Tat-EGFP-pET-28a重组原核表达载体成功构建，IPTG可以诱导蛋白质高表达；采用Ni-NTA纯化和透析可获得较高纯度的蛋白质；5μmol/L Tat-EGFP孵育HT22细胞10 h后，蛋白质穿膜效率较高；Tat-SENP1C重组蛋白可以显著降低HT22细胞中整体蛋白质的SUMO化以及内源性和外源性Akt1 SUMO化。结论：Tat-SENP1C-pET-28a和Tat-EGFP-pET-28a重组原核表达载体构建成功，且被IPTG诱导后可高效表达蛋白质；纯化的Tat-SENP1C蛋白具有较强的穿膜能力及酶活性。