研究背景:巨噬细胞极化类型决定了抗炎和促炎细胞因子的产生,这些细胞因子进一步推动了类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)的发生发展。然而,到目前为止,滑膜和滑膜液中巨噬细胞的协调调节尚未实现。因此,巨噬细胞极化的调节可能是RA的潜在治疗策略。目的:本研究拟构建一种具有B类1型清道夫受体(Scavenger Receptor class Btype1,SR-B1)靶向功能的仿生ApoA-I模拟肽R4F修饰的中性粒细胞膜(Neutrophil membranes,NMs)包被的F127纳www.selleck.cn/products/iacs-010759-iacs-10759米聚合物(R4F-NM@F127),进而实现炎症驱向的关节炎特异性靶向;通过核心负载雷公藤红素(Celastrol,Cel)重编程滑膜和滑膜液巨噬细胞探讨R4F-NM@F127-Cel靶向治疗RA的效应及机制研究。方法:(1)分离中性粒细胞以获得NMs。通过薄膜水化法制备了负载疏水性药物的F127聚合物,进一步与NMs通过程序性物理挤压制备NM@F127。NM@F127与R4F多肽功能化孵育,以制备R4F-NM@F127。通过粒度电位仪和场发射透射电子显微镜(Transmission electron microscopy,TEM)对R4F-NM@F127进行基本性状表征;用高效液相色谱仪(High-performance liquid chromatography,HPLC)和紫外可见分光度计检测R4F-NM@F127的包封特性和吸收峰值。(2)通过共聚焦激光扫描显微镜和流式细胞仪检测R4F-NM@F127对巨噬细胞的靶向能力。(3)通过小动物活体成像系统检测R4F-NM@F127的体内生物分布;通过流式细胞仪和共聚焦成像检测R4F-NM@F127对关节滑膜和滑膜液巨噬细胞的共定位情况。(4)体外构建LPS(100 ng/mL)诱导的RAW264.7细胞炎症模型,并与不同浓度的Cel、NM@F127-Cel或R4F-NM@F127-Cel共孵育6 h或者12 h来评估细胞治疗效果,通过逆转录实时定量聚合酶链反应(Reverse transcription-quantitative polymerase chain reactin,RT-q PCR)检测M1型巨噬细胞标志物(TNF-α、IL-1β、iNOS)和M2型巨噬细胞标志物(IL-10、Arg-1)的mRNA表达情况;通过Western blot检测M1/M2巨噬细胞极化标志物以及与NF-κB和MAPK信号通路相关的关键蛋白表达情况;利用流式细胞仪检测M1/M2巨噬细胞标志物CD86和CD206的平均荧光强度。(5)体内构建胶原诱导的关节炎(Collagen-induced arthritis,CIA)动物模型,通过评估小鼠的体重、关节评分、左右足爪的厚度、关节病理学组织染色、MicroCT分析、滑膜和滑膜液巨噬细胞极化标志物的表达情况评估R4F-NM@F127-Cel的体内治疗效果。结果:(1)R4F-NM@F127的平均粒径为48.09±5.82 nm,电荷为-2.76±0.54 mV,PDAnti-MUC1 immunotherapyI为0.08±0.005,在TEM下呈现典型的核壳结构。白光图像显示,在负载疏水性药物DiR-BOA后,R4F-NM@F127的颜色从无色变为黑蓝色,发生了明显颜色变化;紫外可见吸收光谱结果显示,游离DiR-BOA和DiR-BOA标记的R4F-NM@F127在730 nm处都有明显的吸收峰值。(2)靶向结果表明,R4F-NM@F127具有选择性靶向SR-B1~+细胞的能力,而且能够高效靶向SR-B1~+巨噬细胞;同时体内荧光成像显示,R4F-NM@F127能够优先确认细节积累在发炎的关节中,并被关节滑膜和滑膜液巨噬细胞摄取。(3)体外细胞实验结果表明R4F-NM@F127-Cel以浓度依赖的方式显著抑制M1型巨噬细胞标志物的表达,增加M2型巨噬细胞标志物的表达;同时R4F-NM@F127-Cel可以通过浓度依赖方式抑制NF-κB和MAPK信号通路中重要蛋白的磷酸化水平来显著重编程RAW264.7细胞极化。(4)体内动物实验结果表明R4F-NM@F127-Cel可以显著降低CIA小鼠的关节评分,减轻爪子肿胀程度,并减少滑膜炎症和软骨破坏,并通过重编程巨噬细胞极化有效抑制滑膜炎症,改善关节损伤。结论:R4F多肽修饰的中性粒细胞膜包被的仿生纳米药物(R4F-NM@F127-Cel)具有明显SR-B1~+细胞的靶向能力,能够通过SR-B1受体靶向关节滑膜和滑膜液巨噬细胞,有效抑制滑膜炎症,改善关节损伤,从而为临床治疗RA提供一种有前景的策略。