类风湿关节炎(RA)是一种无法治愈的全身性自身免疫疾病,是造成我国青壮年人群劳动力丧失的主要疾病之一。RA导致患者生活质量降低,严重者甚至会导致残疾。甲氨蝶呤(MTX)作为RA的标准治疗方案,其价格低廉、疗效良好和安全性高,在RA患者中广泛使用。但仍有高达50%的RA患者对MTX治疗反应不佳,或者复发后再次治疗的疗效下降,此时只能选择替代疗法,也错过了最佳治疗时期。RA患者的早期阶段从关节肿胀开始,可能存在三个月的治疗窗口期。在此期间进行治疗,则发生软骨损伤和骨侵蚀的状况相对较少,病情缓解的可能性更大。因此,早期精准的持续治疗可能成为RA的治疗机会之窗,极大可能改善患者疾病活动程度,提高RA达标治疗效率。然而,目前实现患者MTX个性化治疗仍然是一个巨大的挑战,因为在临床上还没有可靠的分子标记物来预测和筛查MTX的治疗反应。因此在分子水平上分析和挖掘有用的生物标记物,从而有可能开发针对性的靶向治疗方法,延缓患者病情和降低疾病活动性程度。本论文的主要研究内容如下:(1)从宁波第一医院风湿免疫科随机选择8名患者和2名健康对照,RA患者诊断符合ACR/EULAR的诊断标准,并按照DAS28-ESR分类方法对患者MTX治疗后的疗效进行评估,分为4名MTX有效(Responder)和4名MTX无效(Non-reImmune clusterssponder)。对10例样本的TCRB CDR3区进行高通量测序,发现Responder组TCR组库多样性明显高于Non-responder组(P>0.05);TRBV6-6基因在HC组和Responder组间(P=0.028)以及在Responder组和Non-responder组间(P=0.003)差异显著;RA患者组出现过度克隆扩增的现象,且Responder组的Top5/10克隆累积频率明显高于Non-responder组;在Responder组和Non-responder组中暂未发现共享克隆。(2)从宁波第一医院风湿免疫科随机选择32名RA初发患者,经平均三个月MTX单药治疗,通过疗效评估后分为21例MTX有效(响应组)和11例MTX无效患者(非响应组)。采用Tetra-p购买diABZI STING agonistrimer ARMS-PCR法对MTX代谢途径基因多态性MTHFR C677T、MTHFR A1298C和MTRR A66G位点进行特异性引物设计,鉴定患者基因型。统计基因多态性与MTX临床疗效和患者疾病活动性的关系,发现吸烟(P=0.03Dinaciclib配制7)、饮酒(P=0.016)以及男性(P=0.037)可能是MTX无反应的影响因素。响应组中基线期ESR水平、TJC、SJC和DAS28经MTX治疗后显著降低(P<0.001)。未观察到基因型与MTX疗效和疾病活动性存在相关性,无法预测MTX反应。