基于Toll样受体4/核因子κB信号通路探究苦参碱对类风湿关节炎风湿热痹证的治疗作用及机制

目的:基于Toll样受体4(此网站Toll-like receptor 4,TLR4)/核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路探究苦参碱对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)风湿热痹证的治疗作用及机制。方法:将60只8周龄SPF级雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、甲氨蝶呤组及苦参碱低、中、高剂量组,每组10只。除正常组外,其余5组均采用牛Ⅱ型胶原诱导联合人工气候箱干预建立RA风湿热痹证模型。甲氨蝶呤组大鼠按照1.0 mg·kg~(-1)以甲氨蝶呤灌胃,苦参碱低、中、高剂量组大鼠分别按照30 mg·kg~(-1)、60 mg·kg~(-1)、120 mg·kg~(-1)以苦参碱灌胃,正常组和模型组大鼠则以等体积蒸馏水灌胃。药物干预均每周1次,共干预4次。观察大鼠的一般情况,测定足趾肿胀度、关节炎指数,以ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)含量,HE染色观察膝关节滑膜组织病理学改变,以实时定量PCR法检测膝关节滑膜组织Bax mRNA、Bcl-2 mRNA、TLR4 mRNA、NF-κB p65 mRNA表达量,以Western Blot法检测膝关节滑膜组织Cleaved caspase-3蛋白、TLR4蛋白、NF-κB p65蛋白、磷酸化核因子κB p65(phosphorylated nuclear factor-κB p65,p-NF-κB p65)蛋白表达量。结果:(1)大鼠一般情况Liproxstatin-1。正常组大鼠毛发顺滑有光泽,饮食、饮水正常,足趾无肿胀;造模后模型组、甲氨蝶呤组及苦参碱低、中、高剂量组大鼠均出现毛发干燥无光泽,摄水量增加,易激惹、攻击性强,足趾肿胀、红热、蜷缩、僵硬等表现;与模型组相比,药物干预后甲氨蝶呤组及苦参碱低、中、高剂量组大鼠毛发干燥无光泽、足趾肿胀等情况有所改善。(2)足趾肿胀度。6组大鼠的足趾肿胀度比较,差异有统计学意义(0.08±0.01,0.51±0.07,0.24±0.04,0.44±0.06,0.37±0.04,0.28±0.06,F=118.983,P=0.000)。模型组大鼠的足趾肿胀度高于其余5组(P=0.000;P=0.000;P=0.000;P=0.000;P=0.000),苦参碱低剂量组大鼠的足趾肿胀度biomarker risk-management