目的在课题组前期研究的基础上,通过环磷酰胺(CTX)建立小鼠药物性肝损伤(DILI)模型,研究美蠊小肽对应用CTX后所造成的小鼠肝脏损伤的保护作用,并探究美蠊小肽是否可以通过SIRT1/FoxO1通路发挥保护作用。旨在为CTX造成的肝损伤的治疗提供解决方案,为美蠊小肽的开发和临床应用奠定理论基础。方法(1)美蠊小肽适宜浓度的确定:40只雌性KM小鼠随机分成对照组、CTX组、美蠊小肽低剂量组和美蠊小肽高剂量组,采集小鼠血液和肝脏,记录小鼠体重和肝脏指数;检测一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的血浆含量以及测定谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的活力;HE染色法观察小鼠肝脏病理学变化;使用q PCR检测SIRT家族和FoxO家族基因表达水平;WB法和免疫组化法检测SIRT1和FoxO1蛋白表点击此处达水平。(2)美蠊小肽对CTX致肝损伤的保护作用:40只雌性KM小鼠随机分成对照组、CTX组、美蠊小肽组和水飞蓟宾组,采集小鼠血液和肝脏,记录小鼠体重和肝脏指数;检测NO、MDA、SOD水平以及ALT、AST活力;HE染色观察肝脏病理学变化。(3)基于SIRT1/FoxO1通路研究美蠊小肽对CTX致肝损伤的保护作用:50只雌性KM小鼠随机分成对照组、CTX组、美蠊小肽组、SIRT1抑制剂(EX527)组和美蠊小肽+EX527组,采集小鼠血液和肝脏,记录小鼠体重和肝脏指数;检测NO、MDA、SOD水平以及ALT、AST活力;HE染色观察肝脏病理学变化;使用q PCR和WB检测SIRT1和FoxO1基因蛋白表达水平。结果(1)灌胃200 mg/kg美蠊小肽比100 mg/kg美蠊小肽对CTX致肝损伤具NSC 125973细胞培养有更好的保护作用。200 mg/kg美蠊小肽能更加显著的减小肝脏指数(P<0.05);降低氧化指标NO、MDA的水平,提高抗氧化指标SOD的活性(P<0.05);减少ALT、AST的水平(P<0.05);上调SIRT1基因表达、下调FoxO1基因表达,并且使SIRT1的蛋白表达提高,acely-Peri-prosthetic infectionFoxO1的蛋白表达降低(P<0.05)。(2)灌胃200 mg/kg美蠊小肽与临床药物水飞蓟宾对CTX致肝损伤的治疗效果相近。同CTX组相比两者均减小了肝脏指数(P<0.05);降低了氧化指标NO、MDA的水平(P<0.05),提高了抗氧化指标SOD的活性(P<0.05);减少了ALT、AST的水平(P<0.05),且两者之间无统计学差异(P>0.05)。(3)SIRT1/FoxO1通路参与了美蠊小肽对CTX致肝损伤的保护作用。美蠊小肽组肝脏中SIRT1的蛋白表达显著性增加,而acely-FoxO1的蛋白表达则显著下调(P<0.05),PCR结果与WB结果基本一致,病理切片发现肝损伤减轻;使用抑制剂后,再用美蠊小肽进行灌胃,SIRT1的蛋白表达则显著性降低,而acely-FoxO1蛋白表达则显著性增加(P<0.05),肝损伤较为严重。结论美蠊小肽对CTX造成的肝损伤具有保护作用,且200 mg/kg的美蠊小肽具有更好的保护效果,美蠊小肽对CTX所致的肝损伤的保护可能通过SIRT1/FoxO1通路发挥作用。