体内多余的脂质在动脉壁过度沉积导致动脉粥样硬化斑块形成。巨噬细胞的极化表型改变selleckchem以及伴随的炎症反应对动脉粥样硬化斑块形成具有重要调节作用。巨噬细胞自噬有助于细胞稳态的恢复,并增加动脉粥样硬化斑块稳定性。鼠尾草酸(Carnosic acid,CA)是从迷迭香属植物提取的酚类二萜化合物,具有抗氧化、减缓衰老和调节脂质代谢等多种药理学活性。Keap1/Nrf2信号通路是体内重要的抗氧化通路,可抑制动脉粥样硬化斑块形成、增加斑块稳定性。本研究利用棕榈酸钠(Sodium palmitate,PA)对RAW264.7细胞进行泡沫化诱导,观察CA干预后,RAW264.7细胞自噬及极化变化情况,并基于Keap1/Nrf2信号通路探讨CA抑制巨噬细胞泡沫化机制,为动脉粥样硬化防治提供体外实验依据。本研究方法及主要结果如下:(1)PA+CA组油红O染色和Bodipy脂质荧光染色阳性率明显低于PA组(p<0.05)。(2)Western Blot(WB)显示,PA+CA组p62蛋白表达水平显著低于PA组,而LC3Ⅱ/Ⅰ比例显著高于PA组(p<0.05),且有剂量依赖性。(3)RT-qPCR、WB显示,与PA组比较,PA+CA组促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α及M1型极化标志物i NOS m RNA、i NOS蛋白表达水平显著降低,抑炎因子IL-4、IL-10、TGF-Staphylococcus pseudinter- mediusβ及M2型极化标志物CD206、Arg1 m RNA表达水平、CD206蛋白表达水平显著增加(p<0.05)。双重免疫荧光显示,与PA组比较,PA+CA组M1型极化标志物CD86相对荧光强度显著降低,CD206相对荧光强度显著增加(p<0.05)。流式细胞术显示,与PA组比较,PA+CA组M1型巨噬细胞(CD86+/CD206-)的比例显著降低、M2型巨噬细胞(CD86-/CD206+)比例显著升高(p<0.05)。(4)用3-甲基腺嘌呤(3-MA)抑制RAW264.7细胞自噬后,油红O染色阳性率显著升高、LC3 II/I比例和CD206蛋白表达水平显著降低、i NOS蛋白表达水平显著增加和CD86相对荧光强度增加、CD206相对荧光强度下降、M1型巨噬细胞(CD86+/CD206-)的比例显著增加、M2型巨噬细胞(CD86-/CD206+)比例显著下降(p<0.05)。用雷帕霉素(RAPA)激活RAW264.7细胞自噬后,则逆转上述情况。(5)WB检测细胞Keap1和Nrf2结果显示,与PA组相比,10μM CA组细胞质Nrf2和Keap1蛋白表达显著降低,细胞核中Nrf2蛋白表达显著增加(p<0.05)。(6)ML385抑制RAW264.7细胞Nrf2表达后,油红O染色阳性率显著升高、LC3 II/I比例和CD206蛋白表达水平显著降低、i NOS蛋白表达水平显著增加、CD86相对荧光强度增加、CD206相对荧光强度下降、M1型巨噬细胞(CD86+/CD206-)的比例显著增加、M2型巨噬PLX4032临床试验细胞(CD86-/CD206+)比例显著下降(p<0.05)。而使用Eze激活RAW264.7细胞Nrf2表达后,逆转上述情况。通过以上结果得出结论,CA通过激活Keap1/Nrf2信号通路,促进RAW264.7细胞内自噬,从而增加RAW264.7细胞M2表型极化比例、抑制M1表型极化比例,最终抑制RAW264.7细胞泡沫化,可作为CA干预动脉粥样硬化发生发展的理论基础和实验依据。