目的 利用簇状规则间隔回文重复序列（CRISPR）/Cas9基因编辑系统构建质粒并敲除裸鼹鼠皮肤Compound C溶解度成纤维（NMRskinfibroblasts，NSF）细胞HIF-1α基因，为研究裸鼹鼠的耐低氧机制及缺氧相关疾病的发生发展机制提供体外细胞模型。方法 针对裸鼹鼠HIF-1α基因的1-4号外显子区域设计4对sgRNA序列，并成功构建表达质粒。筛选得到最优sgRNA后，转染HEK-293T细胞收集上清液测定病毒滴度。前期用pLenti-Cas9(blast)病毒感染NSF细胞，之后用制备的HIF-1α-sgRNA病毒感染表达Cas9蛋白的NSF细胞。经药筛后观察荧光表达，同时提取细胞gDNA和蛋白。通过T7E1酶和WesternBlot检测NSF细胞中HIF-1α基因变化及蛋白表达情况。结果 Sanger测序结果显示，所设计的sgRNA成功插入到pX459和pKLV2-U6-sgRNA2载体上，序列验证正确，重组质粒构建成功；T7E1酶切实验成功切除3条带，sgRNA的打靶效率为54%，WesternBlot结果表明，经药筛后的裸鼹鼠NSF细胞HIF-1α基因敲除成功，蛋白水平显著降低（P=0.0019）；且显微镜下未发现HIF-1α敲除细胞形态的明显变INCB28060小鼠化，基因敲除对细胞增殖能力无明显影响。结论 成功构建靶向裸鼹鼠HIF-1α基因的CRbiomedical agentsISPR/Cas9质粒，且质粒靶向敲除HIF-1α基因功能验证成功，将有利于裸鼹鼠耐低氧机制研究，并为人类缺氧相关疾病防治提供理论依据。