猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)是一种由猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virusPUN30119体外,PEDV)引起的感染后造成进食呕吐、脱水和水样腹泻,进一步形成厌食、抑郁等症状的急性高度传染型胃肠道疾病。PEDV的危害一直影响着全球各个养猪生产国,造成极大的经济损失,自2013年以来,全球出现新型高毒力的PEDV变异毒株爆发式扩散于多个国家。全球PEDV可分为两大类,一类由S基因的系统发育表明可在遗传上分为两个基因群簇,G1基因群和G2基因群,进一步分为G1a和G1b亚群,以及G2a和G2b亚群;另一类根据PEDV全基因组序列和S基因缺失插入突变,将PEDV毒株分为S-INDEL毒株和Non S-INDEL毒株。自2010年前后,我国从南往北多地省份陆续报道其新型的PEDV G2流行毒株的爆发迅速扩散席卷全国。新型变种PEDV G2型流行毒MDV3100采购株致病性更强,传播范围流行更广,G1a亚型经典毒株CV777为首的灭活疫苗免疫原性并不能针对新型G2型变异毒株。因此,掌握地域性猪流行性腹泻病毒的流行现状与流行特征、分离地域特异性优势流行毒株、研制区域特异性高效疫苗成为迫切需要。本实验调查研究2021年9月～2022年12月吉林省部分地区中小型规模化养猪场与散养户采集疑似腹泻样品共计178份,通过实时PEDV、TGEV、Po RV三重荧光定量PCR方法中检测出60份PEDV阳性、9份TGEV阳性、24份Po RV阳性、2份PEDV+TGEV混合阳性、7份PEDV+Po RV混合阳性,阳性率分别为33.7%、5.1%、13.5%、1.1%、3.9%,PEDV总核酸阳性率为38.8%。表明吉林部分地区中小型规模化养猪场与散养户腹泻样品的主要病原体为PEDV。在2021年9月～2022年12月期间,PEDV春夏秋冬季核酸阳性率分别为36.5%、17.6%、20.6%和53.3%。可见春冬两季核酸阳性率高于夏秋两季。通过扩增、测序,成功扩增出14株吉林省PEDV流行毒株S蛋白全基因序列分析,其14份均为G2b亚型流行毒株。检测到的G2b亚型流行毒株与之浙江于2014年检测出的KM609213的S基因核苷酸同源性高达97.1%～99.2%;与日本2014年分离出的MYG-1 S基因核苷酸同源性为97.0%～98.8%;与美国Colorado2013毒株S基因核苷酸同源性为97.0%～98.8%。研究表明,当前吉林地区以PEDV G2b亚型流行毒株为主要流行毒株。本研究检测到的G2b亚型变异毒株和CV777经典毒株进行S蛋白中和表位存在较多的氨基酸差异,且主要集中在COE中和表位区中。将14份G2b亚型流行毒株进行分离鉴定,成功分离出1株G2b亚型毒株命名为JL01/2022株。通过间接免疫荧光实验(IFA)确定增毒后测定TCID_(50)第13代次后稳定在10~(5.0)TCID_(50)/m L以上。JL01/2022株与CV777对比S蛋白氨基酸存在110个突变位点、对比ORF3蛋白氨基酸存在8个突变位点、对比N蛋白氨基酸存在17个突变位点,与中国浙江WS2014毒株的S蛋白、N蛋白、ORF3蛋白氨基酸突变位点最相似。PEDV JL01/2022株S基因核苷酸及氨基酸与CV777相比同源性分别为93.3%、92.9%;与美国OH1414和Colorado2013毒株相比同源性均为98.8%、98.8%;与中国浙江WS2014毒株相比同源性分别为98.9%、98.8%,同源相似性最高。JL01/2022株与CV777的N基因核苷酸同源性为95.9%;与中国浙江WS2014毒株相比N基因核苷酸同源性99.9%相似性最高。JL01/2022株与中国安徽的AH2012毒株进行ORF3基因核苷酸同源性对比为99.8%。且根据Medicina defensivaS基因、N基因、ORF3基因的核苷酸遗传进化树比对,JL01/2022株与WS/China/2014毒株、GD-1/China/2011毒株、AH/China/2012毒株最为相似,均为G2b亚型毒株。综上,PEDV仍是吉林地区造成猪腹泻的主要病毒,并基于S基因、ORF3基因遗传进化分析,本研究鉴定的14株PEDV均为G2b亚型毒株,且成功分离出一株PEDV G2b亚型毒株命名为JL01/2022株,可为其研制区域特异性高效疫苗夯实基础。