目的:研究党参多糖CPC通过TLR4/NF-κB和MAPKs信号通路调节细胞免疫的作用机制。在本文中,我们通过体外实验,基于分子生物学深入研究了党参多糖CPC如何调节细胞免疫活性。研究结果为进一步开发党参多糖作为治疗药物提供了理论参考,为未来的应用奠定了坚实的科学基础。方法:1.CCK-8法检测党参多糖CPC对RAW264.7细胞增殖活性的影响;2.显微镜法观察CPC干预后,RAW264.7细胞形态变化;3.Griess Reagent检测NO含量变化,利用DCFH-DA荧光探针法检测胞内ROS生成变化;4.E获悉更多lisa法检测相关细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)的生成水平;5.Western blot免疫印迹法检测NF-κB/MAPKs信号通路蛋白(p38、Phosphop38、NF-κB p65、Phospho-NF-κB p65、ERK、Phospho-ERK、JNK、PhosphoJNK)表达情况;6.免疫荧光法观察NF-κB/MAPKs信号通路下游p65、p38蛋白活化情况;7.通过受体抑制剂及沉默RAW264.7细胞TLR4受体基因,q PCR法检测TLR4基因m RNA表达情况,Western blot法检测TLR4抑制及基因沉默后CPC对NF-κB和MACP-690550化学结构PKs信号通路激活情况,以验证CPC调节细胞免疫的作用受体。结果:1.党参多糖CPC对RAW264.7细胞未表现出明显毒性,且在一定范围内对RAW 264.7细胞产生促进细胞增殖的作用;2.给予不同浓度CPC(10、25、50μg/m L)作用RAW264.7细胞24 h后,细胞伸出较长伪足呈不规则形激活状态;3.检测细胞上清液中的NO水平,随着CPC浓度的增加,NO释放显著增多(p<0.05);4.荧光倒置显微镜下观察到,CPC处理后,与空白对照组比较,RAW264.7细胞内ROS绿色荧光值呈浓度依赖性显著增高,ROS释放增多;5.CPC处理RAW264.7细胞24 h后,细胞上清中TNF-α、IL-1β、IL-6含量较空白对照组显著增多(p<0.05);6.Western blot结果显示,CPC激活NF-κB和MAPKs信号通路呈时间依赖性,NF-κB在1 h时较空白对照组显著升高(p<0.01),2 h达高峰,4 h后活化现象减弱消失。MAPKs在0.5 h显著升高(p<0.01)且达最高峰,2 h后活化消失。不同浓度CPC(10、25、50μg/m L)处理RAW264.7细胞后,信号通路活化水平呈浓度依赖性增高;7.免疫荧光结果显示,NF-κB信号通路在CPC给药2 h时激活最明显,MAPKs在0.5 h最明显,与Western blot结果一致;8.TLR4受体抑制剂及TLR4基因转染沉默结果显示,TLR4介导了CPC对巨噬细胞的免疫激活。结论:研究结果表明,党参均一葡聚糖CPC具有潜在的增强巨噬细胞细胞免疫活性breast microbiome的作用,其作用机制与激活NF-κB和MAPKs信号通路有关,其作用受体很可能是TLR4。