目的:先天性心脏病(CHD)是指胚胎时期由于心脏及大血管的发育障碍而引起的结构、功能及代谢异常。结合临床先心病病例,通过生物信息学分析,推测HIGCP-690550分子式D2A基因在心脏发育过程中可能有重要的作用,此前并未有报道HIGD2A基因与心脏相关疾病有关。人类HIGD2A基因定位于染色体5q35.2区域,通过转录因子结合预测软件发现HIGD2A基因启动子区存在转录因子AP-2α潜在的结合模序,提示AP-2α可能调控HIGD2A基因的转录。AP-2α是一个重要的心脏发育相关的转录激活因子,AP-2α可通过激活Pitx2c以及TBX20等基因的表达调节心脏发育。通过在体更多外HEK293细胞系和H9C2细胞系中AP-2α对HIGD2A基因的表达调控作用的探究,确定AP-2α是否为HIGD2A基因的转录因子。研究方法:1、生物信息学分析选择鉴定先心病易感基因。2、生物信息学预测易感基因启动子调控元件。3、启动子双荧光素酶报告基因实验探索AP-2α对HIGD2A基因的转录调控作用。4、利用Ch IP和EMSA实验鉴定AP-2α与HIGD2A启动子的结合能力。结果:1、生物信息学预测HIGD2A基因为先心病易感基因。2、生物信息学预测AP-2α在HIGD2A基因启动子区潜在的结合模序。3、启动子双荧光素酶报告基因实验结果:与野生型载体(GV238-HIGD2A-WT)单独转染组活性(10.25)相比,野生型载体(GV238-HIGD2A-WT)与GV362-AP-2α共转染后(18.31),活性增加了78.63%,然而突变型载体(GV238-HIGD2A-MUT)与GV362-AP-2α共转染组活性仅为2.79,与野生型载体(GV238-HIGD2A-WT)与GV362-AP-2α共转染组活性(18.31)相比下降了84.76%。GV238-HIGD2A-A genetype和GV238-HIGD2A-C genetype与GV362-AP-2α共转染组报告基因活性分别为10.92和10.84,与野生型载体(GV238-HIGD2A-WT)与GV362-AP-2α共转染组活性(18.31)相比下降了40.36%与40.80%。4、Ch IP实验的结果:PCR产物DNA凝胶电泳结果显示Input组和AP-2α抗体组呈现出强条带,Ig G抗体组条带显著减弱;对胶回收DNA片段进行Sanger测序,证实Input组和AP-2α抗体组的DNA片段均为目标HIGD2A基因启动子区域。5、EMSA实验的结果:野生型探针(Probe-biotin)与AP-2α反应后出现结合带(泳道4,shift band),100倍竞争后结合带消失(泳道5);突变型探针(Probe-MUT-biotin)与AP-2α反应后无结合带(泳道7);另一结果显示探针(Probe-A-biotin)和(Probe-C-biotin)与AP-2α反应后无结合带。结论:1、通过生物信息学预测,HIGD2A基因可能与心脏发育相关。2、AP-2α对HMiddle ear pathologiesIGD2A基因转录有正调控作用,且AP-2α对SNP位点rs3172921的G基因型调控作用要强于对A和C基因型,AP-2α为HIGD2A基因的转录因子之一。