随着社会的进步和医疗技术的发展,女性平均寿命逐年增加,围绝经期综合征(perimenopausal syndrome,MPS)将困扰越来越多女性。围绝经期卵巢功能的衰退是引发MPS最主要原因,但是雌激素分泌减少引发其他生物学行为改变的机制尚未明确。激素替代疗法(Hormone replacement therapy,HRT)被推荐为治疗MPS的一线治疗方案,但由于其副作用和风险,在我国实际使用率低,因此寻找其它有效的治疗方式尤为重要。研究证明人脐带间充质干细胞(HUMSCs)可以改善鼠围绝经期卵巢功能,但是机制尚未明确。人脐带血浆(human umbilical cord blood plasma,hUCBP)作为HUMSCs的同源生物制品,其改善衰老的作用也逐步成为研究热点。筛选有效的中药制剂更是国内寻求MPS治疗方案的重点。本研究选择两种诱因不同的围绝经期模型,给予不同的制剂进行治疗,观察其对卵巢功能衰退的改善作用并探究机制,为临床治疗MPS提供更多选择。目的:1.探讨围绝经期卵巢功能衰退是否和铁死亡发生相关;2.探讨HUMSC改善围绝经期卵巢功能是否可以通过抑制铁死亡实现;3.探讨hUCBP是否可以通过抑制铁死亡改善围绝经期卵巢功能;4.探讨中药提取物A、B是否可以改善围绝经期卵巢功能。方法:第一部分:HUMSCs改善围绝经期卵巢功能的研究。建立两种诱因导致的围绝经期模型。自然衰老围绝经期模型:选取动情周期紊乱的14-15月龄SD大鼠,随机分为模型组和治疗组(每组30只),以正常3月龄SD大鼠作为对照组,治疗组每日尾静脉注射HUMSCs 1 × 106cells/mL× 1mL ×2d,对照组和模型组注射等剂量生理盐水。VCD致围绝经期小鼠模型:选取8周龄雌性ICR小鼠,模型组和治疗组给予4-乙烯基环己烯二环氧(VCD)160mg/(kg·d)ip×20d;对照组给予等剂量芝麻油。治疗组每日尾静脉注射HUMSCs 1 × 106cells/mL × 0.2mL × 2d,对照组和模型组注射等剂量的生理盐水。分别在末次注射后7、14、21d每组随机处死10只鼠,用ELISA法检测血清中的雌二醇(E_2)、抗苗勒管激素(AMH)、促卵泡激素(FSH)水平,H&E染色观察卵巢组织结构并进行卵泡和黄体计数,生化法检测卵巢组织Fe、脂质氧化物(MDA)、谷胱甘肽(GSH)水平,Western Blot分析大鼠卵巢中铁死亡相关蛋白SLC7A11、DMT1、ACSL4、GPX4的表达情况。第二部分:hUCBP改善围绝经期卵巢功能的研究。建立VCD致围绝经期小鼠模型,随机分为模型组和hUCBP低、中、高剂量治疗组(每组30只)。各治疗组小鼠分别给予hUCBP隔日尾静脉注射175μL、240μL、300μL/只,分别于第一次注射后的7、14、21d处死10只动物,ELISA检测血清中的E_2、AMH、FSH水平,H&E染色观察卵巢组织结构并进行卵泡和黄体计数,生化法检测卵巢组织Fe、MDA、GSH 水平.。第三部分:中药粗提物改善围绝经期卵巢功能的研究。建立VCD致围绝经期小鼠模型,随机分为模型组、阳性对照组和中药粗提物A低、中、高剂量治疗组和B低、中、高剂量治疗组(n=10)。中药粗提物A或B低、中、高剂量治疗组小鼠分别给予灌胃中药粗提物A或B 0.75mg/g、1.5 mg/g、3.75 mg/g×28d;阳性对照组给予戊酸雌二醇灌胃0.009mg/kg×28d。末次给药后处死动物,ELISA检测血清中的E_2、AMH、FSH、LH,H&E染色观察卵巢、子宫组织结构并进行卵泡和黄体计数。结果:第一部分:HUMSCs改善围绝经期卵巢功能的研究。自然衰老围绝经期模型:与对照组相比,模型组大鼠动情周期延长且紊乱,卵巢指数下降;原始卵泡和初级卵泡数显著降低,闭锁卵泡数显著升高(P<0.05)。与模型组相比,给予HUMSCs后治疗组动情周期缩短,趋于正常,卵巢指数上升;原始卵泡、初级卵泡数显著增多,闭锁卵泡数显著减少(P<0.05);血清E_2、AMH水平显著升高(P<0.05),且随时间增加逐渐上升,血清FSH水平显著降低(P<0.05),且随时间增加逐渐降低;卵巢组织Fe、MDA水平显著降低(P<0.05medial stabilized),且随时间增加逐渐降低;GSH水平显著上升(P<0.05),且随时间增加逐渐上升。VCD致围绝经期模型:Decitabine小鼠与对照组相比,模型组小鼠动情周期延长,动情周期紊乱,卵巢指数下降,原始卵泡和初级卵泡数显著降低,闭锁卵泡数显著升高(P<0.05)。与模型组相比,给予HUMSCs后治疗组动情周期缩短,趋于正常;原始卵泡、初级卵泡数显著增多,闭锁卵泡数显著减少(P<0.05);治疗组血清E_2、AMH水平显著升高(P<0.05),且随时间增加逐渐上升,血清FSH水平均显著降低(P<0.05),且随时间增加逐渐降低;治疗组卵巢组织Fe、MDA水平显著降低(P<0.05),且随时间增加逐渐降低;GSH水平显著上升(P<0.05),且随时间增加逐渐上升。自然衰老围绝经期模型组大鼠卵巢中SLC7A11、DMT1和GPX4的蛋白表达水平较对照组显著降低,ACSL4蛋白表达水平显著升高(P<0.05);给予HUMSCs后大鼠卵巢中SLC7A11、DMT1和GPX4的蛋白表达水平较模型组有显著升高(P<0.05),且随时间增加有逐渐升高趋势,ACSL4蛋白表达水平显著降低(P<0.05),且随时间增加有逐渐降低趋势。第二部分:hUCBP改善围绝经期卵巢功能的研究。与对照组相比,VCD围绝经期模型组小鼠动情周期延长,动情周期紊乱,卵巢指数下降,原始卵泡和初级卵泡数显著降低,闭锁卵泡数显著升高(P<0.05)。与模型组相比,给予hUCBP后治疗组小鼠动情周期缩短,趋于正常;原始卵泡和初级卵泡数显著增加(P<0.05),且随时间延长和剂量增加有逐渐增加趋势;闭锁卵泡数显著减少(P<0.05),且随时间延长和剂量增加有逐渐降低趋势;血清E_2、AMH水平显著升高(P<0.05),且随时间延长和剂量增加逐渐降升高;血清FSH水平均显著降低(P<0.05),且随时间延长和剂量增加逐渐降低;治疗组卵巢组织Fe、MDA水平显著降低(P<0.05),且随治疗次数增加时间延长和剂量增加逐渐降低;GSH水平显著上升(P<0.05),且随治疗次数增加时间延长和剂量增加逐渐上升。第三部分:中药粗提物改善围绝经期卵巢功能的研究。与模型组相比,中药粗提物A低、中、高剂量组小鼠动情周期缩短,趋于正常;各级卵泡数和黄体数增加,闭锁卵泡数显著减少,且中剂量组最少(P<0.05);血清E_2、AMH水平显著升高(P<0.05),中剂量组最高;血清FSH、LH水平显著降低(P<0.05),中剂量组最低;子宫内更多膜厚度无显著变化。与模型组相比,中药粗提物B低、中、高剂量组小鼠动情周期缩短,趋于正常;各级卵泡数和黄体数增加,闭锁卵泡数显著减少(P<0.05),且随给药剂量增加逐渐降减少;血清E_2、AMH水平显著升高(P<0.05),且随给药剂量增加逐渐降升高;血清FSH、LH水平均显著降低(P<0.05),且随给药剂量增加逐渐降降低;子宫内膜厚度无显著变化。结论:1.自然衰老和VCD导致的围绝经期鼠卵巢功能衰退与铁死亡的发生相关;2.HUMSCs可能通过抑制铁死亡改善围绝经期卵巢功能;3.hUCBP可能通过抑制铁死亡改善围绝经期卵巢功能;4.中药提取物A、B可以改善围绝经期卵巢功能。