【目的】探讨2019年云南省瑞丽市登革病毒血清型及基因型特点,为当地制定有效的登革热防控策略和措施提供依据。【方法】收集2019年瑞丽市Alisertib体内登革热(Dengue fever,DF)患者急性期血清标本,并储存于云南省寄生虫病防治所资源库-80℃冰箱。采用Axy Prep体液病毒DNA/RNA小量试剂盒提取DF患者急性期血清中登革病毒(Dengue virus,DENV)RNA,采用实时荧光定量PCR法(Quantitative Real Time PCR,q PCR)对DENV核酸检测和血清型鉴定,DENV核酸检测阳性标本血清接种至Vero细胞进行病毒分离培养,提取盲传三代后DENV毒株RNA,经逆转录-聚合酶链式反应法(Reverse transcription PCR,RT-PCR)扩增和琼脂糖凝胶电泳后,切胶回收纯化,将纯化DNA送至生工生物工程股份有限公司(昆明)进行双向测序。在GenMultiplex Immunoassays Bank中检索并下载全球不同年代和不同流行地区的参考序列,使用Snap Gene、Seq Man、Editseq、MEGA X和Megalign等生物学软件进行E基因序列拼接、DENV系统进化树及其核苷酸相似性(氨基酸同源性)分析。采用Excel 2019对瑞丽市2019年DENV数据和相关资料进行分析处理。【结果】共对瑞丽市2019年瑞丽市1000份疑似DF病例急性期血清标本进行DENV核酸检测,其中18份呈阳性,阳性率为1.8%(18/1000);共检测出3种DENV血清型,其中DENV-Ⅰ型2份(11.11%,2/18),DENV-Ⅱ型1份(5.56%,1/18),DENV-Ⅲ型15份(83.33%,15/18),未检测到DENV-Ⅳ型。盲传三代后分离培养出DENV-Ⅰ型毒株2株、DENV-Ⅱ型毒株1株、DENV-Ⅲ型毒株5株;其中扩增出6株毒株E基因目标片,包括DENV-Ⅰ型2株(33.33%,2/6),DENV-Ⅱ型1株(16.67%,1/6),DENV-Ⅲ型3株(50%,3/6)。从系统发育显示,2株DENV-Ⅰ型属于基因型Ⅰ型(Genotype I,G-I),1株DENV-Ⅱ型属于基因型AsianⅠ型,2株DENV-Ⅲ型属于基因型Ⅰ型(Genotype I,G-I)和1株DENV-Ⅲ型属于基因型Ⅲ型(GenotypeⅢ,G-Ⅲ)。对DENV E基因核苷酸相似性分析发现,2株DENV-Ⅰ型E基因核苷酸相似性为98.3%(96.6%),与2019年泰国株(MZ619040)同在一小支,核苷酸相似寻找更多性为97.5%～98.2%,与1945年DENV-Ⅰ原型株(AF425619)核苷酸相似性为92.3%～93.2%;1株DENV-Ⅱ型单独在一个亚分支,与2019年缅甸株(MW788983)、2018年缅甸株(MW788982、MW788981)核苷酸相似性分别为99.7%和99.6%,与1944年DENV-Ⅱ原型毒株(AB609589)核苷酸相似性仅为93.9%;3株DENV-Ⅲ型E基因核苷酸相似性为90.6%～99.6%,其中RL01、RL17株核苷酸相似性高达99.6%;RL01株与2018年缅甸株(MW788903)同在一小分支,核苷酸相似性高达99.8%,RL17株单独在一个亚分支上,与2019年缅甸株(MW788899)、2018年缅甸株(MW788912、MW788903)、2017年缅甸株(MW788879)核苷酸相似性高达99.7%,RL04株与2018年缅甸株(MW788907、MW788911)、2017年缅甸株(MW788887)同在一分支,核苷酸相似性高达99.5%～99.7%,与1956年DENV-Ⅲ原型株H87株(AB609590)核苷酸相似性为92.3%～93.1%。【结论】2019年云南省瑞丽市主要存在3种DENV血清型和4种基因型,即DENV-Ⅰ型G-Ⅰ型、DENV-Ⅱ型AsianⅠ型、DENV-Ⅲ型G-Ⅰ型、DENV-Ⅲ型G-Ⅲ型;其中DENV-Ⅲ基因G-Ⅲ型为瑞丽首次发现;DENV-Ⅰ型毒株可能源于泰国输入,DENV-Ⅱ型毒株和DENV-Ⅲ型毒株可能源于缅甸输入,建议相关部门加强DENV基因型监测。