第一部分小鼠造影剂急性肾损伤的程度与中性粒细胞胞外诱捕网释放的相关性目的:通过构建造影剂急性肾损伤(CI-AKI)小鼠模型,探讨中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)与小鼠肾脏损伤的相关性。方法:本部分采用碘克沙醇构建小鼠CI-AKI体内模型,并在不同时间点或不同剂量造影剂干预后进行取材。通过对血清做ELISA实验,检测小鼠CI-AKI模型构建情况。通过对肾脏石蜡切片,做病理学、透射电镜及免疫荧光组化实验,检测小鼠肾脏损伤情况及中性粒细胞胞外诱捕网的存在。通过对肾脏组织做q RT-PCR和免疫印迹实验,检测小鼠肾脏NETs产物的表达量。结果:1.成功构建小鼠CI-AKI模型。通过HE染色、血肌酐水平和透射电镜观察,模型小鼠肾脏具有明显急性肾损伤的情况。2.小鼠CI-AKI模型与时间和造影剂剂量均有BMN 673细胞培养关系。通过对小鼠注射造影剂后不同时间点取材,发现在24 h肾脏损伤达到高峰,在48 h及之后损伤逐步减轻。而相比于低剂量,高剂量的造影剂对小鼠肾脏损伤程度更大。3.首次在CI-AKI小鼠的肾脏中发现NETs。通过免疫组化和荧光等技术,在病变小鼠的肾脏中捕捉到中性粒细胞发生NETosis的过程,证实NETs参与到小鼠CI-AKI的损伤机制中。4.NETs主要蓄积在CI-AKI小鼠的肾小球和肾小管周围毛细血管中。通过免疫荧光共染技术,成功定位到NETs产物富集在血管内皮细胞周围。5.NETs表达水平与CI-AKI严重程度成正相关。通过对CI-AKI小鼠血清MPO和肌酐水平检测,表明NETs产物与血肌酐含量具有相关性。通过q RT-PCR和免疫印迹对肾脏组织的m RNA和蛋白表达量进行分析,表明NETs水平与CI-AKI小鼠肾脏损伤情况为正相关。结论:在小鼠CI-AKI体内模型中,NETs存在于病变的肾脏中,并主要蓄积在肾小球和肾小管周围毛细血管中。并且NETs表达水平与小鼠肾脏损伤程度呈正相关,表明NETs参与CI-AKI的损伤机制。第二部分抑制中性粒细胞胞外诱捕网可以减轻小鼠造影剂急性肾损伤目的:通过对CI-AKI小鼠进行预处理,抑制NETs形成或降解NETs产物,探讨阻断NETs蓄积对小鼠肾脏的保护作用和机制。方法:本部分将小鼠分为四组:对照组、CI-AKI组、CI-AKI+GSK484组、CI-AKI+DNaseⅠ组。其中GSK484是PADI4的抑制剂,抑制NETs释放;DNaseⅠ破坏DNA结构,可以降解NETs产物。通过免疫组化荧光、免疫印迹等检测NETs标志物的表达量,评价抑制剂的效果。通过病理检测、ELISA、免疫荧光等检测肾脏损伤情况,评估肾小球和肾小管周围毛细血管的损伤改善水平。结果:1.药物预处理可以阻断CI-AKI小鼠肾脏NETs的表达。无论是PManagement of immune-related hepatitisADI4的抑制剂还是NETs产物的降解酶,都能减少CI-AKI小鼠体内NETs的表达量。2.阻断NETs的蓄积可以减轻CI-AKI小鼠肾脏的病理性损伤。通过检测血肌酐水平,并对肾脏做HE和PAS糖原染色,证实减少NETs可以降低血肌酐和肾小管损伤评分。并减轻CI-AKI小鼠体内的炎症水平。3.阻断NETs的蓄积可以减轻肾此网站脏血管内皮的损伤。通过对肾小球和管周毛细血管标志物进行免疫荧光和组化检测,CI-AKI小鼠的标志物表达减少,而抑制NETs可以减轻肾脏血管内皮细胞的损伤。4.阻断NETs的蓄积可以减少肾脏细胞凋亡。在CI-AKI小鼠肾脏中可见明显的细胞凋亡,而降低NETs水平可以减轻细胞凋亡水平。结论:CI-AKI小鼠体内NETs表达显著增多,主要蓄积在肾脏的肾小球和管周毛细血管中,损伤血管内皮细胞。在抑制NETs形成或降解NETs产物后,肾脏的病理损伤减轻,及血管内皮细胞损伤显著缓解。表明NETs促进CI-AKI的发生发展,阻断NETs可以起到改善肾脏损伤的作用。