丙泊酚下调AQP1抑制骨肉瘤细胞活性及迁移能力

目的:骨肉瘤是以U2OS细胞系为代表的骨恶性肿瘤,手术切除是其主要治疗手段。术后存活率的影响因素除了肿瘤标志物水平等,麻醉作用对其生长、复发和转移的影响也逐渐吸引研究者们的关注。丙泊酚是静脉麻醉药中的一种。近年来,研究表明,丙泊酚有能力影响癌细胞在体内和体外的运动,促进癌细胞的增殖和转移。因此,丙泊酚可能是比其他药物更好的临床麻醉用药。据研究表明,AQP1在骨肉瘤细胞中高表达并可参与骨肉瘤细胞发展,尚不清楚丙泊酚是否能通过调节AQP1的表达来影响骨肉瘤的生物学活性。本研究首先通过不同浓度丙泊酚对骨肉瘤细胞的孵育,明确了丙泊酚对骨肉瘤细胞的影响和AQP1FUT-175核磁的表达变化,再加入转染试剂,进一步验证丙泊酚是否通过AQP1影响骨肉瘤细胞的表达。方法:1、进行骨肉瘤细胞培养和免疫荧光染色。2、选择不同浓度丙泊酚孵育骨肉瘤细胞,通过CCK8细胞活性测试和划痕实验验证丙泊酚对骨肉瘤细胞活性和迁移能力的影响。3、AQP1表达水平通过实时定量PCR和Western blot进行检测。4、加入转染试剂,使骨肉瘤细胞内AQP1过表达,分别设置空白对照组、专门无效转染AQP1组,专门转染AQP1组,丙泊酚+无效转染AQP1组、丙泊酚+转染APQ1组,再通过实时定量PCR和Western blot检测转染后骨肉瘤细胞内AQP1表达水平,划痕实验验证丙泊酚是否通过AQP1调节骨肉瘤细胞迁移能力。结果:1、AQP1在骨肉瘤细胞内高表达。2、通过CCK8试验发现丙泊酚浓度逐渐升高,骨肉瘤细胞活性逐渐降低;划痕实验验证丙泊酚浓度逐渐升高,细胞迁移能力逐渐降低。3、通过实时定量PCR和Western blot发现丙泊酚浓度升高,AQP1表达量下降。4、转染后,通过实时定量PCR和Western blot显示单独转染AQP1组细胞AQP1表达量增加;无效转染AQP1组和空白对照组相差不大,而丙泊酚孵育下转染AQP1组中AQP1表达明显受到抑制。5、转染后划痕实验显示单独转染AQP1组Durable immune responses细胞迁移率升高;无效转染组与空白对照组相差不大,无意义;丙泊酚孵育下转染AQP1组中细胞迁移率明显下降。结论:1、骨肉瘤细胞活性Berzosertib体内及迁移能力受到丙泊酚的抑制。2、丙泊酚下调骨肉瘤细胞中AQP1表达并抑制其活性和迁移能力。