三叶青总黄酮增强三阴性乳腺癌细胞对EGFR-TKI敏感性的机制研究

目的 探讨三叶青总黄酮(RTF)对三阴性乳腺癌MDA确认细节-MB-231细胞表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制药(EGFR-TKI)药物吉非替尼(GEF)敏感性的影响及其机制。方法 以不同浓度的RTF或RTF联合不同浓度的GEF处理MDA-MB-231细胞后,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力;将细胞分为对照组(培养基处理)、RTF(25μg·mL~(-1) RTF处理)组、GEF(10μg·mL~(-1) GEF处理)组、GEF+RTF组(10μg·mL~(-1) GEF和25μg·mL~(-1) RTF共同处理)和GEF+RTF+RAPA组(10μg·mL~(-1) GEF、25μg·mL~(-1) RTF和10 nmol·L~(-1) RAPA共同处理)。流式细胞仪检测细胞周期与凋亡;蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)和自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、P62和Beclin-1的表达。结果 对照组、RTF组、GEF组、GEF+RTF组和GEF+RTF+RAPA组处于S期的细胞比例分别为(43.89±3.20)%,(36.36±3.73)%,(此网站30.28±2.87)%,(18.12±1.54)%和(23.82±2.20)%;凋亡细胞的比例分别为(3.60±0.68)%,(12.46±2.80)%,(22.77±3.10)%,(36.19±3.87)%和(27.04±2.84)%;上述5组Cleaved Caspase-3蛋白表达水平分别为0.12±0.03,0.36±0.03,0.48±0.03,0.74±0.06和0.56±0.03;Bcl-2蛋白表达水平分别为0.84±0.06,0.71±0.06,0.57±0.04,0.36±0.03和0.48±0.04;Bax蛋白表达水平分别为0.15±0.03,0.20±0.02,0.30±0.03,0.45±0.03和0.38±0.03;LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平分别为0.98±0.05,0.20±0.02,4.36±0.91,1.10±0.07和2.75±0.58;P62蛋白表达水平分别为0.27±0.03,0.53±0.04,0.12±0.03,0.38±0.03和0.18±0.02;Beclin-1蛋白表达水平分别为0.1diversity in medical practice1±0.02,0.06±0.01,0.40±0.03,0.22±0.03和0.33±0.03。RTF组和GEF组与对照组比较,各项指标差异均具有统计学意义(均P<0.05);GEF+RTF+RAPA组与GEF+RTF组比较,各项指标差异均具有统计学意义(均P<0.05)。结论 RTF可通过抑制自噬增强MDA-MB-231细胞对EGFR-TKI药物敏感性的敏感性。